植物elisa試劑盒如何規范使用
瀏覽次數:471發(fā)布日期:2021-09-26
植物elisa試劑盒基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結合,此種結合不會(huì )改變抗體的免疫學(xué)特性,也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型,出現顏色反應。因此,可通過(guò)底物的顏色反應來(lái)判定有無(wú)相應的免疫反應,顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過(guò)ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)檢測儀進(jìn)行定量測定,這樣就將酶化學(xué)反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來(lái),使ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。
用于標記的酶用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產(chǎn)物易于顯現;能商品化生產(chǎn)。應用較多的有辣根過(guò)氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP應用廣。
純酶的RZ多在3.0以上,高達3.4。RZ在0.6以下的酶制品為粗酶,非酶蛋白約占75%,不能用于標記。RZ在2.5以上者方可用于標記。HRP的作用底物為過(guò)氧化氫,催化反應時(shí)的供氫體有幾種:(1)鄰苯二胺(OPD),產(chǎn)物為橙色,可溶性,敏感性高,吸收值在490nm,可用肉眼觀(guān)察判別,容易被濃硫酸終止反應,顏色可在數小時(shí)內不改變,是國內ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗,酶聯(lián)免疫試劑盒)中常用的一種;(2)聯(lián)大茴香胺(OD),產(chǎn)物為橘黃色,吸收值在400nm,顏色較穩定;(3)5-氨基水楊酸(5-AS):產(chǎn)物為深棕色,吸收值在450nm,部分溶解,敏感性較差;(4)鄰聯(lián)甲苯胺(OT)產(chǎn)物為藍色,吸收值在630nm,部分溶解,不穩定,不耐酸,但反應快,顏色明顯。
堿性磷酸酶系從小牛腸粘膜和大腸桿菌中提取,由多個(gè)同功酶組成。它們的底物種類(lèi)很多,常用者為硝基苯磷酸鹽,廉價(jià)無(wú)毒性。酶解產(chǎn)物呈黃色,可溶,吸收值在400nm。酶的活性以在pH10反應系統中,37℃1分鐘水解1μg磷酸苯二鈉為一個(gè)單位。