人apelin 12(AP12)ELISA Ki實(shí)驗方法操作步驟

人apelin 12(AP12)ELISA Ki實(shí)驗方法操作步驟：

1.編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽(yáng)性對照 2 孔、空白對照 1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

2.加樣：分別在陰、陽(yáng)性對照孔中加入陰性對照、陽(yáng)性對照 50µl。然后在待測樣品孔先 加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm 波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以?xún)冗M(jìn)行。