RT-PCR試劑盒反應就是從RNA反轉錄至cDNA，然后通過(guò)PCR反應擴增cDNA的過(guò)程。試劑盒采用了一步反應法完成整個(gè)RT-PCR反應，即RNA-cDNA-PCR反應操作在同一反應體系中進(jìn)行，反應過(guò)程中不需增加額外的步驟，就可完成整個(gè)RT-PCR反應，同時(shí)整個(gè)反應系統且含有電泳時(shí)所需要的試劑，可直接上樣電泳。本試劑盒具有方便、簡(jiǎn)捷、靈敏度高、重復性好的特點(diǎn)，可適用于各種動(dòng)、植物、病毒RNA的PCR檢測。

　　RT-PCR試劑盒備注：

　　1.用戶(hù)可根據自己的情況調整優(yōu)化PCR反應擴增參數：

　　·退火溫度：可根據實(shí)際情況適當地提高或降低退火溫度（50℃~65℃）。

　　·延伸時(shí)間：延伸時(shí)間因目的序列長(cháng)度的不同而不同

　　·循環(huán)次數：cDNA量較少時(shí)，循環(huán)次數可增加為40~50次

　　·調整鎂離子的濃度

　　2.用戶(hù)可根據本試劑盒提供的β-actin引物（陽(yáng)性對照）驗證RT-PCR體系是否良好（選做）：

　　1.使用前每個(gè)組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；

　　2.取滅過(guò)菌且無(wú)核酸酶的0.2mlPCR管，依次加入。

　　RT-PCR試劑盒使用注意事項：

　　1.平臺效應：PCR不能進(jìn)入平臺期，出現平臺效應與所擴增的目的基因的長(cháng)度、序列、二級結構以及目標DNA起始的數量有關(guān)。故對于每一個(gè)目標序列出現平臺效應的循環(huán)數，均應通過(guò)單獨實(shí)驗來(lái)確定。

　　2.防止DNA的污染：①采用DNA酶處理RNA樣品；②在可能的情況下，將PCR引物置于基因的不同外顯子，以消除基因和mRNA的共線(xiàn)性。

　　3.RNA提取試劑盒：目前試劑公司有多種RNA提取試劑盒、cDNA試劑盒、PCR試劑盒以及RT-PCR試劑盒出售，其原理基本相同，但操作步驟不一。如果使用試劑盒，具體操作步驟請參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。