RT-PCR試劑盒反應就是從RNA反轉錄至cDNA，然后通過(guò)PCR反應擴增cDNA的過(guò)程。Super一步法RT-PCR（AMV）試劑盒采用了一步反應法完成整個(gè)RT-PCR反應，即RNA-cDNA-PCR反應操作在同一反應體系中進(jìn)行，反應過(guò)程中不需增加額外的步驟，就可完成整個(gè)RT-PCR反應，同時(shí)整個(gè)反應系統且含有電泳時(shí)所需要的試劑，可直接上樣電泳。本試劑盒具有方便、簡(jiǎn)捷、靈敏度高、重復性好的特點(diǎn)，可適用于各種動(dòng)、植物、病毒RNA的PCR檢測。

　　RT-PCR試劑盒實(shí)驗請注意：

　　1.用戶(hù)可根據自己的情況調整優(yōu)化PCR反應擴增參數：

　　·退火溫度：可根據實(shí)際情況適當地提高或降低退火溫度（50℃~65℃）。

　　·延伸時(shí)間：延伸時(shí)間因目的序列長(cháng)度的不同而不同

　　·循環(huán)次數：cDNA量較少時(shí)，循環(huán)次數可增加為40~50次

　　·調整鎂離子的濃度

　　2.用戶(hù)可根據本試劑盒提供的β-actin引物（陽(yáng)性對照）驗證RT-PCR體系是否良好（選做）：

　?。?）使用前每個(gè)組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；

　?。?）滅過(guò)菌且無(wú)核酸酶的0.2mlPCR管，依次加入

　?。?）輕混勻，2000rpm離心20s后進(jìn)行RT-PCR反應；RT反應條件：42℃保溫1hr PCR擴增條件：94°C，5min；

　　94°C變性，30sec；

　　54°C退火，45s；

　　72°C延伸，1min；

　　33個(gè)循環(huán)；

　　72°C，10min，

　?。?）應結束后，取反應液10uL進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，確認β-actin基因目的產(chǎn)物片斷為359bp。

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