注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時(shí)間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應體系與反應條件。

儲存條件：

14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

探針?lè )ǎ?/span>
番鴨細小病毒探針?lè )晒舛縋CR檢測試劑盒aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴增相關(guān)。它與目標序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當完整的探針與目標序列配對時(shí)，熒光基團發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應時(shí)，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團與淬滅劑分離。隨著(zhù)擴增循環(huán)數的增加，釋放出來(lái)的熒光基團不斷積累。因此熒光強度與擴增產(chǎn)物的數量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針?lè )ň哂懈叩奶禺愋院蜏蚀_性。
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線(xiàn)（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對照，只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽(yáng)性對照。
1. 標記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見(jiàn)下步），每個(gè)樣品做3次重復。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數值為橫軸，繪制標準曲線(xiàn)。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

應用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀釋陽(yáng)性對照（以 10E2-10E7 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對照，只提供可以直接使用的長(cháng)為 86bp 的 DN段作為陽(yáng)性對照。
2.標記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽(yáng)性對照。放冰上待用
8.重復上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對照。放冰上待用。設置 qPCR 反應（20  μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：

四對苯醌滿(mǎn)天星*培養基

四羥基對苯醌香雪球*培養基

樟腦醌變葉木*培養基

(S)-(-)-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯(lián)萘風(fēng)信子*培養基

1,2,3,4-四萘離體培養根再生（rhizogenesis）培養基

1,3-二羥基萘離體培養愈傷組織再生（callogenesis）培養基

番鴨細小病毒探針?lè )晒舛縋CR檢測試劑盒1,4-二羥基萘離體培養枝芽發(fā)生（caulogenesis）培養基

1,5-二氨基萘菊花組織凍存試盒

1,5-二硝基萘氣生蘭（epiphytic）播種增殖培養基

1,8-二氨基萘氣生蘭（epiphytic）移植維護培養基

1,8-雙(二氨基)萘氣生蘭（epiphytic）克隆增殖培養基

1-氨基萘地生蘭（terrestrial）播種培養基

1-氧基萘地生蘭（terrestrial）移植維護培養基

1-羥基萘地生蘭（terrestrial）增殖培養基

1-代萘蘭花Knudson培養基pCMS-EGFPpCMS-EGFP低溫運輸，-20℃保存2 ug

pCL-AmphopCL-Ampho低溫運輸，-20℃保存2 ug

pCL1pCL1低溫運輸，-20℃保存2 ug

pCL EcopCL Eco低溫運輸，-20℃保存2 ug

pCI-neopCI-neo低溫運輸，-20℃保存2 ug

pCIpCI低溫運輸，-20℃保存2 ug

pCHO1.0pCHO1.0低溫運輸，-20℃保存2 ug

pCGPVpCGPV低溫運輸，-20℃保存2 ug

pC-GoldyTALENpC-GoldyTALEN低溫運輸，-20℃保存2 ug

pCGNpCGN低溫運輸，-20℃保存2 ug