培養步驟:
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

直腸并不直，在矢狀面上有骶曲和會(huì )陰曲兩個(gè)彎曲，骶曲是直腸上段在骶、尾骨前面下降，形成凸向后的彎曲；會(huì )陰曲是直腸尾端繞過(guò)尾骨尖，形成凸向前的彎曲。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍人直腸組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫院，采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。公司提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA鏈，以50ul總反應體系進(jìn)行逆轉錄，體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴格的QA/QC分析，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人直腸組織裂解液，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。

潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達圖譜。

細胞分類(lèi)：

一種：
是凍存產(chǎn)品，由氮直液接拿出，干冰運輸給客戶(hù)。一般不推薦這種，也較少使用這種方式，因為復蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大，一旦細胞狀態(tài)不好，很難說(shuō)是細胞自身不行，還是復蘇沒(méi)操作好；另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大，也不是細胞儲存的方式，快遞時(shí)間也很難控制，多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量；干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種：
是我們復蘇好細胞，QC通過(guò)后，T-25灌滿(mǎn)培養基常溫運輸給客戶(hù)，排除復蘇造成影響，常溫運輸也對細胞影響也不大，只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證：我們的細胞株來(lái)源于A(yíng)TCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，購買(mǎi)到貨后，由我們實(shí)驗室擴增、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測，100%進(jìn)口來(lái)源，100%保證5代以?xún)?，活?gt;95%，無(wú)細菌、真菌、支原體污染。
細胞培養的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對象是活細胞
在實(shí)驗過(guò)程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長(cháng)時(shí)間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結構、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗觀(guān)察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過(guò)細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類(lèi)型的細胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究?jì)热荼阌谟^(guān)察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
以下是公司正在熱銷(xiāo)的相關(guān)產(chǎn)品： 

18.75pg/mlApigenin-7-O-glucronide；芹菜素-7-O-葡萄糖醛苷色素上皮衍生因子檢測試盒

0.188ng/mlAstilbin；落新婦苷色氨酰tRNA合成酶檢測試盒

9.375pg/mlCarbamazepine；卡馬西平色氨羥化酶檢測試盒

1.875pg/ml8-Methoxypsoralen；花椒素三角形四肽重復蛋白1檢測試盒

9.375pg/mlAmygdalin；苦杏仁苷三官能酶亞基β,線(xiàn)粒體檢測試盒

9.375pg/mlDi-tert-octyl-Disulfide；氯化天竺葵素三碘狀腺原氨檢測試盒

0.938pg/mlArecoline hydrobromide；檳榔腮腺炎病IgM ELISA試盒

9.375pg/mlMethyl linolenate；亞麻酯腮腺炎病IgG ELISA試盒

9.375pg/mlPotassium 7-hydroxynaphthalene-1-sulfonate；2-萘酚-8-磺鉀/藏紅花(含構體)軟骨糖蛋白39檢測試盒

0.094ng/mlRosiglitazone hydrochloride；鹽羅格列軟骨寡聚蛋白檢測試盒
人直腸組織提取物載脂蛋白A2(APOA2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)馬來(lái)阿森那平

載脂蛋白A2(APOA2)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)三苯基坎地沙坦西來(lái)替昔酯

P選擇素(SELP)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)他莫昔芬

層粘連蛋白α1(LAMα1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)頭孢替安鹽鹽

層粘連蛋白α1(LAMα1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)頭孢替安鹽鹽(標準品)

層粘連蛋白α1(LAMα1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鹽毛果蕓香,匹魯卡品鹽鹽

脂酶A2激活蛋白(PLAA)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鹽毛果蕓香(標準品)

性鞘脂二酯酶(Alk-Smase)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)絡(luò )塞定（標準品）

性鞘脂二酯酶(Alk-Smase)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)雷公藤內酯（標準品）

性鞘脂二酯酶(Alk-Smase)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)連翹酯苷E(標準品)

膽囊收縮素(CCK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)羅通定/左旋延胡索素/左旋四巴馬汀(標準品）

膽囊收縮素(CCK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酯（標準品）

膽囊收縮素(CCK)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)去氧膽（標準品）

胰高糖素樣肽1(GLP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)鈣黃綠素酰酯

胰高糖素樣肽1(GLP1)檢測試盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)煙酰胺（標準品）